sábado, 23 de febrero de 2008

RECUENTO DE PLAQUETAS

DIRECCION DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CURSO DE HEMOSTASIA Y BANCO DE SANGRE
LABORATORIO 2
RECUENTO DE PLAQUETAS


OBJETIVO

· Realizar el conteo de plaquetas existentes en un milímetro cúbico de sangre total
· Identificar morfológicamente las plaquetas coloreadas con Wright en extendidos de sangre periférica y apreciar su número por campo.
· Correlacionar la práctica con la teoría expuesta en clase.

MARCO TEORICO

Las plaquetas o trombocitos constituyen el elemento forme más pequeño de la sangre; su evaluación en el hemograma manual usualmente sólo se realiza en los extendidos coloreados. En el electrónico, su estudio aporta, además del valor numérico, otros parámetros de importancia diagnóstica, tales como promedio del volumen plaquetario e histograma plaquetario. A esta valoración la llamamos plaquetograma.
Existen dos métodos para el conteo de plaquetas: manual y electrónico.

PROCEDIMIENTO

El conteo de plaquetas se realiza en sangre anticuagulada con EDTA y diluida con oxalato de amonio al 1% mediante el uso de la pipeta para dilución de hematíes y el hemocitómetro.

RECURSOS

· Sangre anticuagulada con EDTA
· Solución de oxalato de amonio al 1% y/ o Rees Ecker
· Pipeta para dilución de hematíes
· Cámara de de recuento de Neubauer
· Laminilla de cuarzo
· Caja de Petri con papel de filtro humedecido
· Agitador de pipetas
· Microscopio
· Material bibliografico
· Presentación en Power point


METODO

· Mezcle cuidadosamente, por inversión por lo menos 10 veces, la sangre anticuagulada con el fin de obtener una muestra homogénea
· Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0 exactamente
· Elimine el exceso de sangre de las paredes externas de la pipeta para no contaminar la solución diluente
· Aspire el líquido diluente hasta la marca 101 exactamente
· Sujeta la pipeta entre los dedos índice y pulgar, desprenda la boquilla y deje en reposo durante 3 minutos
· Agite durante 10 minutos
· Descarte hasta la mitad del bulbo con el fin de eliminar el líquido del capilar e inmediatamente llene la cámara
· Llene la cámara de Neubauer en ambos lados y coloque en ambiente húmedo por 10 minutos. El ambiente húmedo se logra cubriendo la cámara con una Caja de Petri que llevará adherido un disco de papel de filtro humedecido
· Coloque la cámara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y observe el llenado de la cámara. No debe haber agregados plaquetarios. Cuidadosamente enfoque el cuadrado central
· Disminuya la intensidad de la luz. Así le será más fácil distinguir y contar las plaquetas
· Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeñas, opacas, redondas o alargadas, medianamente refráctiles, y a veces con prolongaciones
· El número está determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan las líneas derecha e inferior.

Cálculo

El número de plaquetas por mm se calcula de acuerdo con:
1. Volumen del área contada: 0.1 mm (1x1x0.1)
2. Dilución utilizada : 1:100
3. Número de células contandas

Plaquetas /mm Número de células contadas X 1 X dilución
Volumen de área contada

Plaquetas/mm = B X 10 X 100

Plaquetas /mm = B X 1000

Valores de Referencia
El rango normal para el recuento de plaquetas es de 150.000 a 400.000xmm


OBSERVACIONES

Las plaquetas se cuentan más fácilmente utilizando microscopio de contraste de fase, pero si el microscopio de luz se adecúa correctamente y el conteo se hace con un estricto control de calidad el resultado será igualmente confiable. Especial atención debe tenerse con las soluciones diluentes.
Estas no deben estar contaminadas, pues tanto las partículas como las bacterias pueden similar plaquetas. Los líquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes de su uso. La limpieza de la cámara de Neubauer y de las pipetas es importante en este procedimiento,
Si se observan agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse. El uso de EDTA como anticoagulante ayuda a disminuir la agregación plaquetaria. El rango de error para el recuento de plaquetas en el microscopio de luz es de 16 – 25%. No se debe informar el recuento de plaquetas sin confrontarlo con el extendido de sangre periférica, coloreado con Wright.




IDENTIFICACIÓN DE LAS PLAQUETAS COLOREADAS CON WRIGHT

Los extendido hechos directamente con sangre sin anticoagulante se colorean Wright para observar su apariencia tintorial, su morfología y su número.

RECURSOS

· Sangre sin anticoagulante
· Portaobjetos o cubreobjetos
· Colorante de Wright
· Microscopio
· Aceite de inmersión
· Material bibliográfico
· Presentación en Power point

METODO

· Realice por lo menos cuatro extendidos en cubreobjetos o en portaobjetos, según lo prefiera. Coloree con Wright
· Coloque al microscopio y observe en 10X para calificar la calidad de la muestra en cuanto a coloración y extensión. Si el extendido está técnicamente perfecto coloque el objetivo de 100X e identifique las plaquetas. Estas presentan una tonalidad levemente basófila, lo cual permite detallar una zona central granular llamada cromómero y una zona periférica más clara denominada hilómero. Observe el tamaño de la plaqueta circulante. Normalmente está entre 2 y 4
· Correlacione el número de plaquetas observadas con el recuento obtenido en cámara. Usualmente se observan de 8 a 20 plaquetas individuales por campo con objetivo de 100X
· Informe la presencia de agregados planetarios como un hallazgo normal. Su ausencia puede estar asociada con ingestión de medicamentos que inhiben el proceso de agregación.
· Anormalidades de tamaño o granularidad se deben observar e informar

TAREA

Elabore y entregue el informe de la Práctica
Elabore un mapa mental de la función de las plaquetas
Busque tres casos clínicos que correlacione la práctica con la teoría y realice el análisis y la discución.

EVALUACION:

50% Trabajos entregados
20% Evaluación escrita
30% Sustentación de los casos clínicos.

BIBLIOGRAFIA

BERRIO Margarita, CORREA María Cecilia, JIMENEZ Marta Elena. El hemograma. Editorial Universidad de Antioquia. 2003.